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TYPE DE DIPLOME : Formation qualifiante

FQ Techniques d'études des interactions protéine-protéine

Domaine : Sciences, Technologies, Santé
 
Spécialité : Biologie
  • Faculté

    Faculté des Sciences

Présentation

Objectifs

La formation, composée d’une partie théorique et d’une partie pratique, vise à explorer les interactions protéine-protéine et à initier les participant.e.s aux approches expérimentales utilisées pour rechercher de nouveaux partenaires d’une protéine candidate ou pour valider les interactions de partenaires protéiques potentiels. L’objectif de la partie théorique est de présenter la nature biochimique des interactions protéiques et d’aborder les différentes méthodes utilisées pour les analyser, telles que le double hybride dans la levure, la microscopie optique de fluorescence (co-immunolocalisation, FRET, Duolink®…), les méthodes biochimiques (co-immunoprécipitation et pontage moléculaire, capture par « GST-pulldown »…) et la résonance plasmonique de surface. Dans la partie pratique, trois approches expérimentales sont utilisées pour explorer les interactions au sein d’un complexe protéique, avec des expériences en système cellulaire et in vitro : Co-immunoprécipitation : biotinylation, pontage moléculaire par « cross-linker » et immunoprécipitation de protéines de surface cellulaire | « Proximity Ligation Assay » Duolink® | Résonance plasmonique de surface : système BIAcore

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Compétences visées

Etre familiarisé-e aux techniques d’analyse des interactions « protéine-protéine » en explorant ces interactions par différentes approches expérimentales. Apprendre à effectuer (1) une co-immunoprecipitation avec marquage et pontage moléculaire, suivie de Western blot, (2) un immuno-marquage et un PLA (Duolink®) sur cellules vivantes ou fixées, (3) concevoir une analyse par résonance plasmonique de surface.

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Programme

PARTIE THÉORIQUE (10H)

LES DIFFÉRENTS TYPES D’INTERACTIONS PROTÉINE-PROTÉINE

ANALYSE D’UNE INTERACTION PROTÉINE-PROTÉINE

► Les méthodes utilisées : le double hybride dans la levure, la co-immunolocalisation, le FRET, la co-immunoprécipitation et le pontage moléculaire, la capture par « GST-pulldown », la technologie Duolink® 

► L’analyse quantitative en temps réel : la résonance plasmonique de surface

RECHERCHE DE PARTENAIRES PROTÉIQUES 

► Par crible en double hybride dans la levure

► Approche protéomique

 

PARTIE PRATIQUE (25H)

INTERACTION PROTÉINE-PROTÉINE EN SYSTÈME CELLULAIRE 

► Par co-immunoprécipitation : biotinylation, pontage moléculaire par « cross-linker » et immunoprécipitation de protéines de surface cellulaire 

► Par la technologie Duolink® basée sur le principe du « Proximity Ligation Assay »

INTERACTION PROTÉINE-PROTÉINE EN SYSTÈME IN VITRO 

► La résonance plasmonique de surface : système BIAcore 

► Interaction antigène-anticorps  

► Analyse en temps réel de l’interaction entre deux protéines

 

Des modifications mineures peuvent être apportées sous la
responsabilité de l’encadrement pédagogique

 

Du 16 novembre au 20 novembre 2020

4,5 jours / 35 heures

2250 €

(TVA 0% incluse)

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Contrôle des connaissances

MOYENS PERMETTANT DE SUIVRE L’EXÉCUTION DE L’ACTION ET D’EN APPRÉCIER LES RÉSULTATS:
Liste d’émargement
Questionnaire de satisfaction
MODALITÉS D’ÉVALUATION:
Attestation de formation délivrée par l’université

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Aménagements particuliers

MOYENS PEDAGOGIQUES ET TECHNIQUES D’ENCADREMENT

Ressources humaines :
Encadrement par des enseignant.e.s-chercheur.e.s de l’Université et des intervenant.e.s extérieur.e.s
Ressources matérielles :
Supports pédagogiques remis en version papier et sous format PDF sur clés USB.

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Admission

Public cible

Technicien.ne.s, ingénieur.e.s et chercheur.e.s des entreprises et des collectivités dans le domaine des sciences du vivant.
Conditions d’ouverture : 6 inscriptions minimum et 12 maximum

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Pré-requis

Connaissances de base en biologie générale et en biochimie des protéines ; pratique expérimentale.

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Droits de scolarité

2250 €

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Contacts

  • Reine RIGAULT

    Contact administratif
    • 01 57 27 82 34
    • reine.rigault@u-paris.fr

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