Chromatographie liquide et couplages (HPLC, UHPLC, LC-MS)

Cet enseignement présente les différentes techniques de chromatographiques en phase liquide. Après un rappel sur les phénomènes mis en jeu et les grandeurs caractéristiques, les différents paramètres chromatographiques et le choix des conditions opératoires sont abordés. Les travaux pratiques sont axés sur le domaine pharmaceutique et l’analyse environnementale.

En travaux pratiques sont utilisés les détecteurs UV/Vis, spectrofluorimétrique, conductimétrique et spectromètre de masse. Les principaux thèmes abordés sont les suivants :

• avantages de la CLHP, la classification des techniques ;
• loi de darcy, le problème de la pression, l’appareillage ;
• équations fondamentales ;
• les différentes techniques : adsorption, partage, exclusion, échange d’ions, affinité, supercritique ;
• la chromatographie couche mince haute performance (HPTLC) ;
• les colonnes et les solvants ;
• l’échantillon.

Ces travaux pratiques concernent les deux points ci-dessous.

• Le cycle de base : ce cycle utilise la CLHP pour comprendre l’importance de la rigueur et de la traçabilité. Il renforce aussi la compréhension des facteurs de séparation des molécules et quelques manipulations portent sur la qualification d’appareil et la validation de méthode. La pratique de l’HPTC est également abordée au travers de l’étude d’un mélange de trois principes actifs de médicaments.

• Le second cycle, porte sur l’analyse d’anions dans l’eau, optimisation de la séparation de polyaromatiques et concentration pour analyse, optimisation dans la séparation et la quantification de parabènes, étude du temps de sortie de sept molécules pharmaceutiques en fonction du pH (1,5 à 12) du tampon puis mise au point de leur séparation dans un mélange des sept molécules.

Cette UE présente le couplage de la chromatographie liquide à différentes méthodes de détection (UV-vis, spectrofluorimétrique, conductimétrique et spectromètre de masse) ainsi que ses applications dans le domaine du contrôle et développement analytique

Contrôle continu et examen terminal